客戶成功案例分享

挑戰

Mark Miller 博士是位于圣路易斯的華盛頓大學醫學院體內成像中心的副教授兼主任，他在制造和使用多光子顯微鏡方面有著豐富經驗，尤其是該技術在活體免疫研究中的應用。 這包括對白細胞運輸和抗原呈遞的里程碑式研究，以及計算生物學的新用途。例如，他的團隊首先揭示了涉及APC（抗原呈遞細胞）靶標的 T 細胞群并不是由趨化因子梯度支配，而是以隨機運動開始（Miller 等人，Science，2002 年；Miller 等人，PNAS，2004 年；Miller 等人，JEM，2004 年）。

自 2012 年以來，他還擔任體內成像核心部門的主任。在該部門，他建造了一個通用型多光子顯微鏡，向跨學科研究人員開放，用于傳染病體內研究的單細胞成像。 建造這個顯微鏡的關鍵是需要兩路獨立可調的激光（Zinselmeyer 等人，Methods Enzymology，2009 年），以實現使用多個熒光團的靈活實驗。 還需要激光器使用方便，可靠性高，從而極大滿足多用戶使用的需求。

解決方案

圖 1. WashU IVIC 定制雙光子系統

Miller 博士最終選擇對一臺市售顯微鏡進行修改，為其配備了兩臺 Chameleon Vision II 激光器，部分原因是他之前在免疫學實驗室中使用過 Chameleon Ultra 激光器，有豐富的使用經驗。他補充說，他選擇 Vision II 是因為這些型號提供了鈦寶石激光器中的長波長直接調諧范圍。 “這為我們的合作者提供了全面的激發波長，包括用于自發熒光的 800 nm、用于綠色（和青色）熒光蛋白的 900 nm，以及用于 mfruit 系列紅色熒光蛋白的 1040 nm。長波長也有助于在較長采集時間的活體組織實驗中最大限度減少自發熒光和光損傷。”

圖 2.“T 細胞抗原識別”的體內雙光子成像揭示了隨機 T 細胞運動在啟動適應性過程中發揮的關鍵作用免疫反應。頸部淋巴結中的 T 細胞（紅色）從高內皮小靜脈（粉紅色）遷移出來并隨機接觸樹突狀細胞（綠色，放大視圖）。

Miller 博士指出，創新性的售后服務是他選擇這種激光器的另一個關鍵因素。 “當我們激光器遇到問題的時候，Coherent 立即幫助我們將激光器恢復到了 100% 的新機性能，僅有的停機時間實際上只是將替換激光器運送到我實驗室的時間。”雖然他對 Vision II 激光器非常放心，但他解釋說合同仍然提供“安心”的售后服務體驗，保證實驗可以不間斷運行。

成果

Miller 博士表示，雙激光器顯微鏡在性能、可靠性和操作簡便性方面取得了巨大成功，新用戶通常只需幾個小時的實踐培訓就可以操作該系統。這一儀器幫助科研人員在幾十種不同主題的出版物上發表了數據。Miller 博士在 YouTube 上發布了一個令人印象深刻的演示文稿，其中包括大量圖像和視頻，這些圖像和視頻記錄了他使用活體多光子成像方法的長期經驗。

參考文獻：

Two-photon imaging of lymphocyte motility and antigen response in intact lymph node.

Miller MJ, Wei SH, Parker I, Cahalan MD. Science. 2002 Jun 7;296(5574):1869-73. doi: 10.1126/science.1070051. Epub 2002 May 16.

T cell repertoire scanning is promoted by dynamic dendritic cell behavior and random T cell motility in the lymph node. Miller MJ, Hejazi AS, Wei SH, Cahalan MD, Parker I. Proc Natl Acad Sci U S A. 2004 Jan 27;101(4):998-1003. doi: 10.1073/pnas.0306407101. Epub 2004 Jan 13.

Imaging the single cell dynamics of CD4+ T cell activation by dendritic cells in lymph nodes.

Miller MJ, Safrina O, Parker I, Cahalan MD. J Exp Med. 2004 Oct 4;200(7):847-56. doi: 10.1084/jem.20041236.

Chapter 16. Two-photon microscopy and multidimensional analysis of cell dynamics.

Zinselmeyer BH, Dempster J, Wokosin DL, Cannon JJ, Pless R, Parker I, Miller MJ.

Methods Enzymol. 2009;461:349-78. doi: 10.1016/S0076-6879(09)05416-0.

（文章轉載自網絡，如有侵權，請聯系刪除）